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蛋白质纯化的一般程序-博盈官方网站
来源:博盈官方网站    发布时间:2021-03-11 18:01:02
本文摘要:蛋白质纯化的一般程序分为前处理、细分级、细分级三个步骤。

蛋白质纯化的一般程序分为前处理、细分级、细分级三个步骤。在前面,要提高某种蛋白质,首先要把蛋白质从原来的组织和细胞中以沉淀的状态释放出来,维持原来的自然状态,不要失去生物活性。因此,动物材料应首先去除结缔组织和脂肪组织,种子材料应首先去除壳体,去除皮肤,以免受单宁等物质的污染,油种子最差用低沸点的有机溶剂,如乙醚等脱脂。然后根据情况自由选择必要的方法,破碎组织和细胞。

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动物的组织和细胞可以用电动破碎机或等浆机破碎或超声波处理破碎。植物的组织和细胞由纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁,一般需要用石英砂或玻璃粉和必要的提取液一起研磨,或者用纤维素酶处理也可以超出目的。

细菌细胞的破裂很困难。细菌细胞壁整体的骨架本质上是通过共价键连接的肽聚糖囊状大分子,非常结实。破碎细菌细胞墙的常用方法有超声波破碎、砂磨、高压破碎或溶菌酶处理等。

的组织和细胞破裂后,自由选择必要的缓冲液提取必要的蛋白质。细胞碎片等不溶物用离心或过滤器的方法去除。如果所需的蛋白质主要集中在细胞核、染色体、核糖体或可溶性细胞质等细胞组成部分,则可以利用差速离心的方法分离,收集该细胞组成部分作为下一个提高的材料。

如果蛋白与细胞膜或膜质细胞器融合,则必须使用超声波或除污剂分解膜结构,然后使用必要的介质提取。细分级别分为蛋白质提取液(有时有核酸、多糖等)获得后,配合必要的方法,将所需的蛋白与其他所谓的蛋白分离。

一般来说,这一步的分离采用盐分析、等电点溶解和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简单,处理量大,能去除大量杂质,稀释蛋白溶液。有些蛋白提取液体积小,不适合用溶解或盐分析法稀释,可以用过滤、凝胶过滤器、冷藏真空湿润或其他方法稀释。

粗分级分离样品细分级分离后,一般体积小,蛋白质大部分被删除。进一步提高纯度,一般用于分析法,包括凝胶过滤器、溶胶分析、导电分析、亲和分析等。适当的时候也可以选择电泳法,包括区域带电泳、等电点探讨等作为最后的提纯步骤。

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粗分级分离的方法一般规模较小,但分辨率较高。结晶是蛋白质分离提高纯度的最后一步。虽然结晶过程不能确保蛋白一定是一样的,但只有当某种蛋白在溶液中的数量中占有优势时才能构成结晶。结晶过程本身也预示着一定程度的纯化,重结晶可以去除少量夹杂的蛋白质。

由于结晶过程中没有发现变性蛋白,蛋白结晶不仅是纯度的标志,也是推测产品处于自然状态的有力指标。


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